Die Höchstgeschwindigkeit für alle Verkehrsteilnehmer beträgt 30 km/h. Das bedeutet: Auch wenn ein eingeschränkter PKW-Verkehr bzw. das Parken und Rangieren auf Fahrradstraßen genehmigt ist, muss Tempo 30 eingehalten werden. Radfahrer dürfen sich gegenseitig überholen, nebeneinander und auch in Gruppen fahren, solange der Fahrradverkehr insgesamt dadurch nicht beeinträchtigt wird.
Generell haben Fahrradfahrer Vorfahrt vor anderen Verkehrsteilnehmern. Aber Achtung: An Kreuzungen gilt für alle Verkehrsteilnehmer die Regel „rechts vor links“. Radfahrern kann aber auch die Vorfahrt eingeräumt werden. Das kann entweder durch Schilder angezeigt werden oder oftmals kommen auch sogenannte Gehwegüberfahrten zum Einsatz. Hier sind der Gehweg und der Bordstein der Fahrradstraße abgesenkt und führen so die Fahrradstraße nahtlos und zumeist farblich markiert über die einmündende Fahrbahn hinweg.
Personen, die die Fahrradstraße mit Pedelecs oder E-Scootern befahren, müssen besondere Rücksicht nehmen, um den Fahrradverkehr nicht zu beeinträchtigen. So gilt auf Fahrradstraßen die Regel, dass beim Überholen innerorts ein Mindestabstand von 1,50 Metern zu Fahrradfahrern einzuhalten ist. Dies gilt für alle Verkehrsteilnehmer, die Radfahrer überholen möchten.